Question

【題目】乙醇燃料已成為國際上普遍公認可降低環境污染和取代化石燃料的主要資源�？衫�用纖維素分解菌將植物秸稈中的纖維素降解為小分子糖類，后經酵母菌發酵即可生產乙醇。下面是分離、篩選纖維素分解菌的部分過程，請回答相關問題：

（1）從富含纖維素的環境中分離得到纖維素分解菌，這說明尋找目的菌株的方法之一是___________。為了分離纖維素分解菌，在配制選擇培養基時以____________作為唯一碳源；從代謝類型分析，培養反芻動物胃中的纖維素分解菌時，必須提供無氧環境的原因是____________。

（2）在篩選纖維素分解菌時，可在培養基中加入_________染料，然后根據菌落周圍是否產生______來篩選目的菌株。

（3）純化菌株時，通常使用的劃線工具是____________。劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。分析造成第二劃線區域的第一條線無菌落的可能原因是____________。

（4）初步篩選后，還需進行發酵產纖維素酶的實驗，纖維素酶活性的測定方法一般是____________。

Answer 1

【答案】到相應生存環境中尋找 纖維素 動物胃中的纖維素分解菌為異養厭氧型，在無氧條件下才能存活 剛果紅 透明圈 接種環 接種環灼燒未冷卻劃線（或未從第一區域末端開始） 對纖維素酶分解纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定

【解析】

分解纖維素的微生物的分離實驗的原理：
①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產生纖維素酶。纖維素酶是一種復合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。
②在培養基中加入剛果紅，可與培養基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，紅色復合物不能形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

（1）從富含纖維素的環境中分離得到纖維素分解菌，這說明尋找目的菌株的方法之一是到相應生存環境中尋找。為了分離纖維素分解菌，在配制選擇培養基時以纖維素作為唯一碳源；動物胃中的纖維素分解菌為異養厭氧型，在無氧條件下才能存活，因此培養反芻動物胃中的纖維素分解菌時，必須提供無氧環境。

（2）剛果紅染料可以與纖維素形成紅色復合物，故在篩選纖維素分解菌時，可在培養基中加入剛果紅染料，然后根據菌落周圍是否產生透明圈來篩選目的菌株。

（3）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環。劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落�？赡苁堑诙�次劃線過程中，接種環灼燒未冷卻劃線（或未從第一區域末端開始）導致。

（4）初步篩選后，還需進行發酵產纖維素酶的實驗，發酵方法有固體發酵和液體發酵；纖維素酶活性的測定方法一般是對纖維素酶分解纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。