Question

19．據報道，從部分企業生產的速凍食品中檢出葡萄球菌超標，“細菌門”事件引起公眾普遍關注．葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養基上形成的菌落周圍會出現特有的乳白色的乳濁環．請回答下列問題．
（1）某興趣小組欲檢測某果汁類食品中含有葡萄球菌，請幫他們完善下列步驟．
①配制培養基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后調節PH，分裝到錐形瓶后進行高壓蒸汽滅菌，在無菌狀態下加入卵黃液（100mL10%滅菌NaCl溶液中加一個雞蛋黃，振蕩均勻）搖勻后立即倒平板．
②接種：取待檢測果汁2.5ml加入22.5ml滅菌生理鹽水中，制成接種樣液．
實驗組：將接種樣液用平板劃線法接種在含卵黃的固體培養基上．
對照組：將25ML無菌生理水用劃線法接種在含卵黃的固體培養基上或不接種作為空白對照．
將上述接種后的培養皿同時放在36℃的恒溫箱中培養48h．
觀察：通過觀察培養基表面是否出現周圍有乳濁環的菌落．
（2）培養基中的牛肉膏和蛋白胨為葡萄球菌生長和繁殖提供碳源和氮源．葡萄球菌能耐受高濃度的NaCl溶液，所以在配制培養基時加入高濃度的NaCl溶液可以將它分離出來，此培養基屬于選擇培養基．
（3）若要統計某土壤樣品中該活菌數目，宜采用稀釋涂布平板法．在此操作中將1mL的菌液稀釋1000倍，最后在培養的在三個平板上統計的菌落數分別是120、121和125．據此可得出每克土壤中該細菌的含量為1.22×10⁹（1220000000） 個．

Answer 1

分析 微生物的分離
①利用該分離對象對某一營養物質的“嗜好”，專門在培養基中加入該營養物質，使該微生物大量增殖．這些物質主要是一些特殊的碳源、氮源，如纖維素可用來富集纖維素分解微生物，尿素可用來富集尿素分解微生物．
②利用該分離對象對某種抑制物質的抗性，在混合培養物中加入該抑制物質，經培養后，由于原來占優勢的它種微生物的生長受到抑制，而分離對象卻可趁機大量增殖，使之在數量上占優勢．如篩選酵母菌和霉菌，在培養基中加入青霉素，因青霉素可抑制細菌和放線菌的細胞壁的合成，從而抑制兩類微生物的生長，而酵母菌和霉菌正常生長增殖．

解答 解：（1）①配制培養基時，分裝之后要進行高壓蒸汽滅菌法滅菌處理．
②由于對照組使用平板劃線法，故實驗組也要采用平板劃線法；空白對照組不接種，或將25ml無菌生理鹽水接種在含卵黃的固體培養基上．觀察實驗結果是否有葡萄球菌，從題干中可知，關鍵是觀察培養基表面是否出現周圍有乳濁環的菌落．
（2）牛肉膏和蛋白胨中含有蛋白質，故能為葡萄球菌的生長和繁殖提供碳源和氮源；高濃度的NaCl溶液可以把葡萄球菌分離出來，故該培養基屬于選擇培養基．
（3）要統計土壤中的活菌數目，最好采用稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計數不能區分死菌和活菌．根據題意可知，每克土壤中該細菌的含量為（120+121+125）÷3×1000×1000=1.22×10⁹．
故答案為：
（1）①高壓蒸汽滅菌
②平板劃線     25ML無菌生理水        空白
③是否出現周圍有乳濁環的菌落
（2）碳源和氮源       高濃度的NaCl溶液     選擇
（3）稀釋涂布平板     1.22×10⁹（1220000000）

點評 本題考查微生物的分離和培養，意在考查考生理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系的能力．