Question

【題目】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。

（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用_____________酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的__________________和____________________之間。

（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。PCR技術(shù)利用的原理是_______，該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核苷酸、模板DNA、_______和__________。

（4）生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)會(huì)產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時(shí)通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以_________________增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換。

Answer 1

【答案】胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 啟動(dòng)子 終止子 DNA分子的復(fù)制 Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶） （干擾素基因特異性的DNA）引物對(duì) （兩種引物） 增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積

【解析】

（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，為了使幼蠶組織分散為單個(gè)細(xì)胞，通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。

（2）啟動(dòng)子位于目的基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA；終止子位于基因的尾端，終止轉(zhuǎn)錄。為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間。

（3）PCR技術(shù)利用的原理是DNA分子復(fù)制的原理。PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA 、Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）和兩種引物。

（4）細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)通常表現(xiàn)出：貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制，多孔的中空薄壁小玻璃珠能增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量。