Question

12．如圖是利用農桿菌轉化法培育轉蘇云金桿菌（Bt）毒素蛋白基因植物的過程示意圖（amp^r為抗氨芐青霉素基因），表格內是3種相關限制酶的識別序列與酶切位點示意圖．

（1）圖1過程②是基因工程基本步驟，稱為將目的基因與運載體重組．
（2）運用HindⅢ與BamHⅠ酶切目的基因與質粒，并加入DNA連接酶來構建重組質粒的方法的缺點是該種方法會產生4種重組質粒，不利于篩選．為了改善上述問題，可以改用BstⅠ或BamHⅠ酶．
（3）本實驗選用的運載體是圖中的pBR質粒和Ti質粒，他們的基本單位是脫氧核苷酸．
（4）下列關于質粒運載體的說法正確的是ACDE（多選）．
A．質粒運載體作用之一是防止目的基因被核酸酶降解
B．質粒運載體只能在與目的基因重組后進入細胞
C．目的基因插人質粒后，不能影響質粒運載體的復制和表達
D．③中Ti質粒的T-DNA片段可以協助目的基因導入植物細胞
E．沒有限制酶就無法使用質粒運載體．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：圖示是利用農桿菌轉化法培育轉蘇云金桿菌（Bt）毒素蛋白基因植物的過程示意圖，其中①表示目的基因，②表示基因表達載體的構建過程，③表示將目的基因導入農桿菌細胞；④表示采用農桿菌轉化法將目的導入植物細胞．

解答 解：（1）圖1②表示基因表達載體的構建過程．
（2）運用HindⅢ與BamHI酶切目的基因與質粒，并加入DNA連接酶來構建重組質粒的方法會產生4種重組質粒，不利于篩選，為了改善上述問題，可以改用BstI或BamHI酶．
（3）由圖可知，本實驗選用的運載體是pBR質粒和Ti質粒，它們都是雙鏈環狀DNA分子，因此基本單位是脫氧核苷酸．
（4）A、質粒運載體作用之一是防止目的基因被核酸酶降解，A正確；
B、質粒運載體本身可以進入細胞，不一定要與目的基因重組，B錯誤；
C、目的基因插人質粒后，不能影響質粒運載體的復制和表達，C正確；
D、Ti質粒的T-DNA片段可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上，因此可以協助目的基因導入植物細胞，D正確；
E、作為運載體要有限制酶的切割位點，因此沒有限制酶就無法使用質粒運載體，E正確．
故選：ACDE．
故答案為：
（1）將目的基因與運載體重組
（2）該種方法會產生4種重組質粒，不利于篩選  BstⅠ或BamHⅠ
（3）pBR質粒和Ti質粒 脫氧核苷酸
（4）ACDE

點評 本題結合利用農桿菌轉化法培育轉蘇云金桿菌（Bt）毒素蛋白基因植物的過程示意圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，能正確分析題圖，同時能結合圖中信息準確答題．