Question

【生物--現代生物科技專題】
某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam HI三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環素基因和抗氨芐青霉索基因．利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題．

（l）在構建重組質粒時，應選用

 

兩種限制酶對

 

進行切割，然后進行連接，以保證重組DNA序列的唯一性．
（2）為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養基中加

 

，理由是

 

．
（3）將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用

 

技術，即通過

 

和

 

兩個主要過程最終形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,植物培養的條件及過程

專題：

分析：分析題圖：質粒和含抗鹽基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內切酶酶切位點．
在質粒上，這三種限制酶的切割位點都位于抗四環素基因上，用其任何一種酶都會破壞四環素抗性基因；在含抗鹽基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會破壞目的基因．

解答： 解：（1）BamHI的酶切位點在目的基因（抗鹽基因）中，若用此限制酶，會破壞目的基因的結構，最終得不到轉基因抗鹽煙草，所以選用SalⅠ和HindⅢ對質粒和含抗鹽基因的DNA進行切割．
（2）由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位點在抗四環素基因中．在構建重組質粒時，抗四環素基因結構遭到破壞，故只能在培養基中加入氨芐青霉素來篩選導入重組質粒的農桿菌．
（3）采用植物組織培養技術可將植物細胞培育成完整的植株．植物組織培養過程中，主要經過脫分化和再分化形成完整植株，此過程須向培養基中加入植物激素（如生長素和細胞分裂素）．
故答案為：
（l）SalⅠ和HindⅢ質粒和抗鹽基因的DNA
（2）氨芐青霉素  重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環素基因被破壞
（3）植物組織培養  脫分化  再分化  植物激素（植物生長調節劑或生長素和細胞分裂素）

點評：本題結合題圖考查基因工程的相關知識，特別是基因表達載體的構建過程，要求考生明確該步驟需要限制酶和DNA連接酶，至于需要哪種或哪幾種限制酶，需要考生分析題圖，選擇的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒，但不能破壞目的基因；考生要明確植物基因工程需要借助于植物組織培養技術，并且能夠識記植物組織培養的過程和條件．