Question

9．H18雜交瘤細胞產生的抗人肝癌單克隆抗體HAb18對于人體肝癌的靶向治療具有重要的意義，但H18雜交瘤細胞在培養過程中的凋亡現象制約著細胞的高密度培養以及生產能力的提高．通過基因工程可改造H18雜交瘤細胞的抗凋亡能力，相關研究步驟如下：
①細胞培養：將人肝癌細胞在含10%小牛血清的培養液中培養．一段時間后，用胰蛋白酶處理培養液，漂洗后調整細胞懸液濃度為1×10⁷個•mL^-1．
②免疫小鼠：向小鼠體內注射肝癌細胞懸液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾臟制成細胞懸液備用．
③細胞融合及篩選：將脾臟細胞懸液和骨髓瘤細胞懸液在50%PEG作用下進行融合，篩選出能產生抗人肝癌單克隆抗體HAb18的H18雜交瘤細胞．
④改造H18雜交瘤細胞：利用PCR技術獲得小鼠的bcl-X_L基因（抗凋亡基因），構建表達載體，通過脂質體法導入H18雜交瘤細胞，再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細胞．請分析回答：
（1）步驟①肝癌細胞培養液中加入小牛血清的目的是補充細胞生長所需的未知營養物質，培養液中還需加入一定量抗生素的目的是防止雜菌污染．
（2）步驟②中，肝癌細胞免疫小鼠需在一定時間內間隔注射3次，其目的是加強免疫，刺激小鼠機體產生更多的淋巴細胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進細胞融合外，常用的生物誘導因素是滅活的病毒．步驟④中通過脂質體法將表達載體導入H18雜交瘤細胞的原理是膜的流動性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應抗癌藥物結合制成的“生物導彈”治療肝癌的主要優點是能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量．
（5）乙醇有誘導細胞凋亡的作用．為了建立H18雜交瘤細胞凋亡檢測模型，科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導H18雜交瘤細胞凋亡，其結果如圖所示．抗凋亡細胞株的建立與篩選應選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導6h（或510mmol/L乙醇誘導5h～6h）．

Answer 1

分析 分析柱形圖：該實驗的自變量乙醇誘導的時間及乙醇的濃度，因變量是凋亡細胞的比例，根據實驗結果可知：乙醇濃度為510mmol/L，誘導6h～7h，細胞凋亡的比例最高．

解答 解：（1）步驟①肝癌細胞培養液中加入小牛血清，目的是補充細胞生長所需的未知營養物質．培養液中還需加入一定量抗生素的目的是防止雜菌污染．
（2）肝癌細胞免疫小鼠需在一定時間內間隔注射3次，其目的是增強免疫，刺激小鼠機體產生更多的淋巴細胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進細胞融合外，常用的生物誘導因素是滅活的病毒，物理誘導方法有電刺激（震蕩、離心等）；步驟④中通過脂質體法將表達載體導入H18雜交瘤細胞的原理是膜的流動性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應抗癌藥物結合制成的“生物導彈”治療肝癌的主要優點是：能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量
（5）抗凋亡細胞株的建立與篩選應選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導6h，因為此時凋亡細胞比例最大．
故答案為：
（1）補充細胞生長所需的未知營養物質      防止雜菌污染
（2）加強免疫，刺激小鼠機體產生更多的淋巴細胞
（3）滅活的病毒       膜的流動性
（4）能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量
（5）510mmol/L乙醇誘導6h（或510mmol/L乙醇誘導5h～6h）

點評 本題是探究性實驗，意在考查考生分析柱形圖，獲取實驗結論的能力，對于動物細胞培養條件的識記和理解能力，難度中等．