Question

下表為幾種限制酶識(shí)別的序列及切割位點(diǎn)，下圖所示，抗原基因用EcoRⅠ和A1uⅠ酶切，載體質(zhì)粒上有EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ酶的識(shí)別位點(diǎn)，但只用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切。再通過(guò)DNA連接酶形成重組質(zhì)粒T。若再用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒T，將可得到DNA片段的種類數(shù)是

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列和 切割位點(diǎn)	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

       A．l       B．2       C．3       D．4

Answer 1

A

解析:

解答該題的關(guān)鍵點(diǎn)是對(duì)限制酶特性的理解，一種限制酶只能識(shí)別特異的核苷酸序列，并且只能在特定的位點(diǎn)切割。先看表，四種限制酶識(shí)別的序列各不相同，且切割的位點(diǎn)也不一樣。AluI和SmaI切割的是平口，一般情況下在基因工程中是無(wú)意義的，但在該題中有用；ECORⅠ和PSTⅠ切得是回文序列。目的基因用EcoRI和AluI酶切得到XY片段，可以看出X端是回文序列，Y端平口，說(shuō)明X端是用EcoRI酶切得，Y端使用AluI酶切得；載體質(zhì)粒用EcoRI和SmaI酶切得到MN片段，可以看出M端是回文序列，N端是平口，說(shuō)明M端是用EcoRI酶切得，N端使用SmaI酶切得，MN上還有一個(gè)PstI酶切點(diǎn)；在連接酶的作用下，目的基因和質(zhì)粒構(gòu)成了重組質(zhì)粒。Y和N的結(jié)構(gòu)由于是用AluI和SmaI酶切得的，它們重新組成的序列已經(jīng)不能被題中四種限制酶中的任何一種識(shí)別并切割了。X和M的結(jié)構(gòu)是用同一種限制酶EcoRI切得的，因此還能被EcoRI酶識(shí)別并切割。因此若用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到2種DNA片斷；EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒，只能得到1種DNA片斷。