Question

基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。根據圖示判斷下列操作正確的是（    ）                        

A．目的基因和質粒均用限制酶Ⅱ切割    

B．目的基因和質粒均用限制酶Ⅰ切割

C．質粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

D．質粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

 

Answer 1

【答案】

D

【解析】一般情況下，要把目的基因連接，需要用同一種或同兩種限制性內切酶酶切質粒和目的基因。在本題中，酶II的識別序列是酶I識別序列的一部分，如果質粒用酶II處理，那么在geneI和II區都會被切斷，質粒變成了兩段線性序列。所以質粒只能由酶I酶切。

如果目的基因用酶I處理，那么目的基因與質粒只有一段能夠相連(目的基因的左邊被酶I切割形成粘性末端，質粒gene I區被酶I切割成粘性末端。但是目的基因的右端不能被酶切，所以不能與質粒相連)。用酶I切割質粒后，gene II區形成兩個粘性末端（GATC）；用酶II切割目的基因后，兩段形成的粘性末端均為GATC。兩者可以連接，形成閉合環狀。