Question

【題目】基因工程的第四步是篩選導入重組質粒的受體細胞。

（1）作為受體大腸桿菌不應含有青霉素抗性基因，原因是___________________________。

（2）用培養基篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌，制備時除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外還應加入物質應包括____

A．細胞分裂素 B．瓊脂 C．噬菌體 D．青霉素

（3）培養基配制和滅菌時，滅菌與調節pH的先后順序是__________。檢測該菌的數量可采用稀釋涂布平板法計數，用該法接種培養后可得到圖中________（A / B）所示的結果。

（4）假如基因工程改造的是細菌，規模化生產并提純分泌型脂肪酶，需要加入硫酸銨使酶蛋白與其他雜質分離，這屬于酶分離提純步驟中的______。為了便于重復使用，制得的脂肪酶往往要固定化。圖為固定化與非固定化脂肪酶的相對酶活性與溫度的關系，比較圖的兩條曲線，寫出固定化酶的優勢是_________，劣勢是__________。

Answer 1

【答案】B D 先調節pH后滅菌 B 沉淀 在30℃以上的較高溫度下也有較高的酶活性 在20-30℃之間固定化酶的活性比較低

【解析】

從功能上看，培養基中含有青霉素，屬于選擇培養基；從物理狀態上來說，培養基屬于固體培養基。采用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法。常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。

（1）如用大腸桿菌作為受體細胞，若大腸桿菌含有青霉素抗性基因則會干擾篩選，因此該大腸桿菌中不應含有青霉素抗性基因。
（2）培養導入了重組質粒的大腸桿菌時，需配制培養基。該培養基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入的物質有瓊脂和青霉素。
（3）培養基配制和滅菌時，先調節PH后滅菌。獲得圖A效果是線性分布，接種方法是劃線法；獲得圖B效果是均勻分布的，接種方法是涂布法。
（4）加入硫酸銨使酶蛋白與其他雜質分離，這屬于酶分離提純步驟中的沉淀；圖3為固定化與非固定化脂肪酶的相對酶活性與溫度的關系，比較圖3中的兩條曲線變化趨勢可知：固定化酶的優勢是在30℃以上的較高溫度下也有較高的酶活性，劣勢是在20-30℃之間固定化酶的活性比較低。