Question

[生物一現代生物科技專題]必答題
肺細胞中的let7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌．研究人員利用基因工程技術將let-7基因導人肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制．該基因工程技術基本流程如圖1．

請回答：
（1）進行過程①時，需用

 

酶切開載體以插入let-7基因．載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為

 

．
（2）進行過程②時，需用

 

酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養．
（3）研究發現，如let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2．據圖分析，可從細胞中提取．

 

進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄．肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中

 

（RASmRNA/RAS蛋白質）含最減少引起的．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,動物細胞與組織培養過程

專題：

分析：分析圖1：圖1表示利用基因工程技術將let-7基因導人肺癌細胞的過程，其中①表示基因表達載體的構建過程；②表示細胞的傳代培養過程．圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達的原理，let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制．

解答： 解：（1）過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制性核酸內切酶（簡稱限制酶）對載體進行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結合的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程．
（2）過程②表示動物細胞培養，培養過程中出現接觸抑制現象后，可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細胞，隨后分裝到新的培養瓶中進行傳代培養．
（3）判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來檢測，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交．根據題中信息“肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌”知，導入let-7基因后，肺癌細胞的增殖受到抑制；據圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達的機理是：let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制．
故答案為：
（1）限制性核酸內切酶（或限制）   啟動子
（2）胰蛋白
（3）RNA   RAS蛋白

點評：本題考查基因工程的原理和技術、動物細胞與組織培養、遺傳信息的轉錄和翻譯的相關知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能分析圖1，準確判斷各過程的名稱；識記動物細胞培養的過程和條件，掌握遺傳信息的轉錄和表達過程，能利用圖2信息答題．