Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

請回答：

(1)步驟①中，核移植技術需要把供體細胞核和去除______的MⅡ中期卵母細胞構建成重組細胞，重組細胞經過動物細胞培養再發育成重組胚胎。

(2)ES細胞（胚胎干細胞）來源于早期胚胎和____，它在形態上的特性是____；在功能上的特性是_____。

(3)步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體。獲取目的基因時，可以利用___技術擴增Rag2基因片段，該技術的前提是根據Rag2基因的______設計引物。

若果要用HindⅢ和Pst I限制酶分別在含Rag2基因的DNA片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段，為將該片段和載體連接，所選擇的載體上也應具有的酶切位點的限制酶種類是_____。

(4)為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞中的________，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】細胞核 原始性腺 體積小、細胞核大、核仁明顯 具有發育的全能性，即可以分化為成年動物體內任何一種組織細胞 PCR 核苷酸序列 Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶 蛋白質

【解析】

本題中涉及到細胞核移植和基因工程和干細胞培養等技術手段，通過圖中方法進行基因治療小鼠沒有免疫排斥現象。

（1）細胞核移植的過程是將體細胞核移植到去細胞核的發育到MⅡ中期卵母細胞中。
（2）胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。胚胎干細胞在形態上的特性是體積小、細胞核大、核仁明顯 ，功能上的特性是具有發育的全能性，即可以分化為成年動物體內任何一種組織細胞 。

（3）擴增目的基因用PCR技術可以短時間內獲得大量目的基因，在擴增前需要提前根據已知的Rag2基因的核苷酸序列設計引物。為了使目的基因和載體能連接，目的基因和載體需要用相同的限制酶切割，切出相同的黏性末端便于連接，Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，因此選擇的載體上也應具有的酶切位點的限制酶種類是Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶。

（4）檢測基因是否表達用抗原-抗體雜交法，可提取治療后小鼠骨髓細胞中的蛋白質，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。