下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖。請據圖回答：
⑴過程①和②必需用到的酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。綠色熒光蛋白基因在豬體內表達的步驟是＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
⑵重組質粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有＿＿＿＿＿＿＿＿＿才能構成一個完整的基因表達載體。
⑶為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法來達到目的。
⑷將所采集到的卵母細胞在體外通過顯微操作將其＿＿＿＿＿＿＿＿＿去除并形成重組細胞，然后再通過＿＿＿＿＿＿＿技術培養成早期胚胎。
（5）早期胚胎的培養液成分較復雜，除一些無機鹽和有機物外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養成分，以及＿＿＿＿＿＿＿等物質。
科目：高中生物 來源： 題型：
分析回答有關生物工程中的問題：
日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖．據圖回答：
（1）綠色熒光蛋白基因在該實驗中是做為________基因。圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。限制性內切酶I的識別序列和切點是—G’GATCC—，請畫出質粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的過程：________________________
_________。
（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是_______________________。
(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是（用數字表示）：_______ ___ 。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達出藍色熒光蛋白。
(5)在培養重組細胞時，培養液中通常含有_____________、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。
(6)以上培育過程中應用到的生物技術有_________________________________等（至少答出三項）。
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科目：高中生物 來源：2010年安徽省合肥市第一中學高二下學期期中考試生物卷 題型：綜合題
(7分)我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農業大學的種豬場自然分娩產出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖回答：
(1)過
程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。重組質粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿等才能構成一個完整的基因表達載體。
(2)將所采集到的卵母細胞在體外培養到＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細胞核去除并形成重組細胞，然后再通過＿＿＿＿＿＿＿＿技術培養成早期胚胎。
(3)早期胚胎的培養液成分較復雜，人們對細胞所需的營養物質還沒有完全搞清楚，通常加入＿＿＿＿等一些天然成分。
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科目：高中生物 來源：2013屆海南省高二下學期期中考試生物試卷（解析版） 題型：綜合題
2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：
注：圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。
（1）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來 ，理由是： 。
（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多的方法是 。
（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是 。獲得的轉基因克隆豬，可以解決的醫學難題是，可以避免 。
（4）目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是： （用數字表示）。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達出藍色熒光蛋白。
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科目：高中生物 來源：2010-2011學年吉林省高三沖刺（一）（理綜）生物部分 題型：綜合題
2008年1月7日，東北農業大學培育出我國第二代綠色熒光蛋白轉基因克隆豬。研究人員是先從一種特殊水母中提取綠色熒光蛋白基因，然后把該基因經過處理后轉移到培養的豬胎兒成纖維細胞的基因組中，再把轉基因體細胞的細胞核移植到成熟的去核豬卵母細胞中構建成轉基因胚胎。再經過手術移植入受體母豬，經過發育最終獲得綠色熒光蛋白轉基因克隆豬。
下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖。請據圖回答：
（1）過程①和②必需用到的酶是 。
（2）重組質粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有 才能構成一個完整的基因表達載體。
（3）為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射 的方法，做超數排卵處理，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到 期即可通過顯微操作將其細胞核去除。
（4）早期胚胎的培養液成分較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素．激素．氨基酸．核苷酸等營養成分，以及 等物質。
（5）如果想同時得到多頭綠色熒光蛋白轉基因克隆豬，可通過胚胎分割技術得以實現。但應選擇發育良好．形態正常的 期胚胎進行操作，且要注意 ，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育。
（6）與一般的繁育良種動物方式相比較，胎胎移植的優勢是 。
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科目：高中生物 來源：2010年廣東省汕頭市高二下學期期中試題生物卷 題型：綜合題
2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農業大學的種豬場自然分娩產出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖回答：
（1）圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。若限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC一，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC一。在質粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。
①請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）GFP基因與目的基因一起構建到載體上不影響目的基因的表達，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質的結構與功能,且對細胞無毒性作用，因此GFP基因可以運用作為基因表達載體上的＿＿＿＿＿＿。
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后還要通過＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技術來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上。
（4）為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超數排卵處理，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細胞核去除。
（5）早期胚胎的培養液成分較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物質。
（6）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程屬于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：＿＿＿＿＿＿(用數字表示)。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計
③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)
④表達出藍色熒光蛋白
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