Question

【題目】重組人血小板生成素(rhTP0)是一種新發現的造血生長因子，如圖為通過乳腺生物發生器產生rhTP0的相關過程。回答下列問題：

（1）構建重組質粒時選用的限制酶是__________，原因是_________。重組質粒中的標記基因是________，標記基因的作用是____________。

（2）圖中所示的過程與胚胎工程相關的有_____________(至少寫出兩個)。

（3）若檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，檢測方法是___________技術，其次還需檢測目的基因____________，這是檢測目的基因是否發揮作用的第一步，最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。

Answer 1

【答案】HindⅢ和XhoⅠSmaⅠ的酶切位點位于目的基因中間，如果用SmaⅠ切割，不能得到完整的目的基因(或用HindⅢ和XhoⅠ可以得到完整的目的基因)抗卡那霉素基因鑒別受體細胞中是否含有目的基因，以便篩選體外受精、早期胚胎培養(動物細胞培養)、胚胎移植DNA分子雜交是否轉錄出mRNA

【解析】

據圖分析，圖中目的基因上存在三個限制酶切割位點，由于SmaⅠ的酶切位點位于目的基因中間，利用該限制酶會破壞目的基因，因此應選用HindⅢ和XhoⅠ兩種限制酶切割目的基因，而利用這兩種限制酶切割質粒會破壞質粒上的抗四環素基因，則質粒上應選用抗卡那霉素基因作為標記基因。

（1）根據以上分析已知，圖中SmaⅠ酶切位點位于目的基因中間，如果用SmaⅠ切割，不能得到完整的目的基因，因此應選用HindⅢ和XhoⅠ兩種限制酶切割目的基因。標記基因用于鑒別受體細胞中是否含有目的基因，以便篩選；由于利用這兩種限制酶切割質粒會破壞質粒上的抗四環素基因，則質粒上應選用抗卡那霉素基因作為標記基因。

（2）圖中受精卵的獲得首先需要進行體外受精，再通過早期胚胎培養獲得桑椹胚或囊胚，最后再利用胚胎移植技術移植到母羊子宮中。

（3）檢測目的基因是否插入了受體細胞的DNA上，一般采用DNA分子雜交法；基因發揮作用的第一步是轉錄，產生的mRNA可以用分子雜交法進行檢測。