Question

【題目】回答下列關于生物技術實踐的有關問題。

（1）為篩選胞外蛋白酶分泌型菌種，一般從___________（A． 果園中 B． 肉類加工廠周圍 C． 酒廠周圍 D． 草炭土）獲得土樣，用經___________的蒸餾水稀釋，備用。

（2）培養基的配制和滅菌：根據目標微生物的特性，配制相應的培養基，裝入三角瓶中蓋上封口膜后，口朝上豎直擺放于高壓蒸汽滅菌鍋中進行滅菌。其中封口膜的作用是_______________________。影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、時間，以及_______________________等（答2點即可），若對含葡萄糖的培養基進行滅菌，通常設置的壓力要求是_______________________。

（3）擴大培養：將土壤稀釋液接種于以白蛋白作為唯一____________的液體培養基中，進行振蕩培養。振蕩培養使微生物繁殖較快的原因是____________________________________________（答2點即可）。

（4）分離純化：將菌液稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液，取各濃度稀釋液0．1mL分別涂布到LB培養基和選擇培養基。將培養皿倒置放入37℃恒溫箱中培養24h，觀察菌落數。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要進行的處理是___________________________________。

Answer 1

【答案】B 高壓蒸汽滅菌 既通氣又不使雜菌進入 滅菌材料和數量、鍋內空氣含量 500mg/cm2壓力 氮源 供氧、充分利用培養基 灼燒并冷卻

【解析】

1. 實驗室常用的滅菌方法

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養皿)和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15~30min。

2. 培養基的營養構成：各種培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。選擇培養基是在培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長。稀釋平板法在培養基上分離、培養出微生物的單個菌落，以便于計數、移植、分離，從而達到純培養的目的。

（1）肉類的主要成分是蛋白質，因此為篩選胞外蛋白酶分泌型菌種，一般從B肉類加工廠周圍獲得土樣，用高壓蒸汽滅菌的蒸餾水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培養基上培養。

（2）高壓蒸汽滅菌過程中封口膜的作用是既通氣又不使雜菌進入，影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、時間，以及滅菌材料和數量、鍋內空氣含量等，若對含葡萄糖的培養基進行滅菌，通常設置的壓力要求是500mg/cm2壓力。

（3）擴大培養：蛋白酶可以專一性分解蛋白質，因此根據篩選菌種的特點，將土壤稀釋液接種于以白蛋白作為唯一氮源的液體培養基中，進行振蕩培養。振蕩培養可以使供氧充分，同時使微生物能夠充分利用培養基中的養分，使微生物繁殖較快。

（4）分離純化：利用稀釋涂布平板法進行分離純化。將菌液稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液，取各濃度稀釋液0．1mL分別涂布到LB培養基和選擇培養基。將培養皿倒置放入37℃恒溫箱中培養24h，觀察菌落數。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要進行灼燒滅菌后并冷卻處理。