Question

轉基因生物可用于生產人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等。下圖一是通過生物工程培育能產生人胰島素煙草的過程。請據圖回答：

（1）基因工程的核心步驟是______（填字母）。此過程所需的工具酶是                    

（2）下圖二是運載體和反轉錄得到的胰島素基因的片段，已知限制酶I的識別序列和切點是—G↓GATCC－，

限制酶Ⅱ的識別序列和切點是－↓GATC－。GeneI和 GeneII為質粒上的標記基因，根據圖分析, 應用限制

酶           切割質粒，用限制酶         切割目的基因。構建的重組質粒中,除含有外源基因、標記基

因外,還必須含有          和           。

（3）B過程中，常用_________處理使細菌成為感受態細胞，從而利于重組質粒的導入。

（4）如果從分子水平檢測人胰島素基因是否表達成功，可以采用                 方法。

 

Answer 1

【答案】

（1）A          限制酶和DNA連接酶

（2）I        Ⅱ（1分）            啟動子              終止子

（3）Ca²⁺　　（4）抗原-抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）基因表達載體的構建是基因工程的核心是目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以傳給下一代的關鍵；目的基因與運載體之間重組需要限制性內切酶將載體切割，再通過DNA連接酶將目的基因與載體之間連接。

（2）由圖示知限制酶I的識別序列為—G↓GATCC－故只能切割標記性Gene II，限制酶II識別序列為－↓GATC－所以不僅能切割Gene I也能切割Gene II，兩個標記性基因在構建表達載體時最少需要保留一個故只能用限制性內切酶I切割質粒；切割目的基因時如果用限制性內切酶I切割只能在圖示左端切割右端無法切割因而無法獲取含有目的基因的DNA片段，如果用酶II切割不僅能在左端切割也能在右端切割這樣就可以獲取含目的基因的DNA片段且又能與運載體進行連接，所以切割目的基因時要用酶II。在構建的重組質粒中除了外源基因和標記基因外還需啟動子和終止子，啟動子位于基因首端是RNA聚合酶識別和結合的位點，終止子位于基因的尾端。

（3）為了讓重組質粒有利于導入細胞中通常用Ca²⁺處理細菌使之成為感受態細胞。

（4）目的基因導入受體細胞后是否可以穩定維持和表達其遺傳特性通常采用分子雜交技術進行檢測。用DNA分子雜交技術檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，檢測目的基因是否轉錄時提取轉基因生物的mRNA與基因探針進行雜交觀察是否顯示雜交帶，檢測目的基因是否表達成蛋白質是從轉基因生物中提取蛋白質用相應抗體進行抗原—抗體雜交觀察是否有雜交帶出現。

考點：本題考查基因工程中目的基因獲取、表達載體的構建、重組質料導入、目的基因表達檢測等識點，意在考查考生對知識理解能力和讀圖能力，試題偏中等難度。