Question

17．如圖表示為平板劃線法分離純化細菌示意圖．根據所學生物學知識，完成下列問題．

（1）微生物所需的營養成分包括碳源、氮源、水和無機鹽．
（2）培養微生物時，除考慮微生物生長所需的營養外，還要考慮微生物生長所需的溫度、pH以及是否需要O₂等．
（3）若要從環境中分離純化出所用的微生物，則具體方法應是：
第一步：配制培養基．該培養基必須含有微生物生長所需要的基本營養成分．
第二步：滅菌．對培養基用高壓蒸汽方法進行滅菌．
第三步：接種．在固體培養基上，微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
第四步：培養．在適宜溫度下培養．一般用平板倒置的方法進行培養，這樣可以防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染．      
 第五步：挑選符合要求的菌落．
（4）做如圖所示的操作時，為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要對接種環灼燒滅菌，平板劃線結束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交（相接、相連、交叉等）．
（5）脲酶可以將尿素分解為氨，從而使尿素溶液pH升高，這可用酚酞試劑來檢驗．用纖維素做唯一碳源的培養基培養微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混雜有自養微生物（硝化細菌）．
（6）抗生素可以抑制肽聚糖合成，從而可以抑制多數原核生物繁殖．實驗室現有酵母菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌三種微生物混雜生長的固體培養基，已知大腸桿菌菌落遇伊紅-美藍試劑變為紫色，并帶有金屬光澤；金黃色葡萄球菌耐高濃度食鹽水，菌落為金黃色；酵母菌細胞壁成分主要為幾丁質，營養條件好，氧氣充足，顯微鏡下可見典型的出芽生殖．現在請你設計一個合理的實驗方案，從一個培養基中，將三種微生物一次分離開來．（所需試劑可自選）
實驗方案：根據菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養基中加入伊紅-美藍，將變為紫色，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．

Answer 1

分析 本題考查多為識記內容，如培養基的成分、微生物生長條件、常用的滅菌方法等：平板劃線法時如果劃線相重合則不能分離出純種；酚酞可檢驗堿性溶液，用纖維素做唯一碳源的培養基培養微生物，得到纖維素分解菌，但自養菌可以利用空氣中的二氧化碳，也能生存，需要進一步分離，根據條件可以將不同菌分離開來．

解答 解：（1）微生物的營養物質主要包括體液、氮源、水和無機鹽等．
（2）培養微生物時，除考慮微生物生長所需的營養外，還要考慮微生物生長所需的溫度、pH及是否需要O₂等．
（3）第二步：培養基常采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．
第三步：固體培養基上的接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
第四步：在適宜溫度下培養微生物．為防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染，一般用平板倒置的方法．
（4）平板劃線操作時為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要對接種環灼燒滅菌．最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交．
（5）脲酶可以將尿素分解為氨，從而使尿素溶液pH升高，酚酞可檢驗堿性溶液．用纖維素做唯一碳源的培養基培養微生物，得到纖維素分解菌，但自養菌可以利用空氣中的二氧化碳，也能生存，需要進一步分離．
（6）根據題意，該實驗方案應該設計為：根據菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養基中加入伊紅-美藍，將變為紫色，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．
故答案為：
（1）碳源    　氮源       
（2）pH
（3）高壓蒸汽　  平板劃線法  　稀釋涂布平板法　  　平板倒置  
培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染
（4）對接種環灼燒滅菌　相交（相接、相連、交叉等）
（5）酚紅指示劑　自養微生物（硝化細菌）
（6）方案：根據菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養基中加入伊紅-美藍，將變為紫色，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．（分離順序不唯一，答案合理即可）

點評 本題結合圖示主要考查微生物的培養基制作、接種、分離等知識，意在強化學生對相關知識的識記、理解與運用．