Question

【題目】為了增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。

（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用__________法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因。所含三種限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切點如圖所示，則用______酶處理兩個基因后，可得到______端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖所示Ii質粒的T—DNA中，構建_________并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含__________的固體平板上培養得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養基振蕩培養，可以得到用于轉化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是____________，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過__________技術，可培育成轉基因油菜植株。

（4）用________法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達

Answer 1

【答案】（1）PCR ClaⅠ和DNA連接 A和 D

（2）基因表達載體（或“重組質粒”） 四環素（1分）

（3）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞 植物組織培養

（4）抗原-抗體雜交

【解析】（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，可以得到用于轉化的浸染液．

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜．進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養技術，可培育成轉基因油菜植株．

（4）用抗原-抗體雜交法在分子水平上可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．