Question

【題目】通過設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)目的基因的定點(diǎn)誘變。如圖為基因工程中獲取突變基因的過程，其中引物1序列中含有一個(gè)堿基T不能與目的基因片段配對，但不影響引物與模板鏈的整體配對，反應(yīng)體系中引物1和引物2的5'端分別設(shè)計(jì)增加限制酶a和限制酶b的識別位點(diǎn)。有關(guān)敘述正確的是（　　）

A. 引物中設(shè)計(jì)兩種限制酶識別位點(diǎn)有利于目的基因定向插入

B. 在PCR反應(yīng)體系中還需要加入4種游離核苷酸、解旋酶、Taq酶等

C. 第3輪PCR，引物1能與圖中②結(jié)合并且形成兩條鏈等長的突變基因

D. 第3輪PCR結(jié)束后，含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA占1/2

Answer 1

【答案】AC

【解析】

根據(jù)圖中可得，由于引物的一個(gè)堿基在不影響與模板鏈整體配對的前提下不與目的基因配對，再利用PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了目的基因的定點(diǎn)誘變。其技術(shù)原理是堿基互補(bǔ)配對原則。

引物中設(shè)計(jì)兩種限制酶識別位點(diǎn)，可以配合載體的限制酶識別位點(diǎn)，幫助目的基因定向定點(diǎn)插入質(zhì)粒連接，A選項(xiàng)正確；PCR反應(yīng)體系中需要加入引物、4種游離的核苷酸、Taq酶，不需要解旋酶，直接利用高溫解旋，B選項(xiàng)錯(cuò)誤；第3輪PCR中，物質(zhì)②是引物2以引物1拓展得到的DNA鏈為模板進(jìn)行復(fù)制得到的，故引物1能與圖中②結(jié)合并且形成兩條鏈等長的突變基因，C選項(xiàng)正確；第3輪PCR結(jié)束后，含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA只有一條，D選項(xiàng)錯(cuò)誤。