Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖l、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。

（1）一個圖1所示的質粒分子經Sma Ⅰ切割后，含有_________個游離的磷酸基團。用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____________________。

（2）與只使用EcoR I相比較，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優點在于________________________________________________。

（3）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在_______________的培養基中培養，以完成目的基因表達的初步檢測。

（4）下列有關限制酶的敘述正確的是__________________。

A．從反應類型來看，限制酶催化的是一種水解反應

B．限制酶的活性受溫度、pH的影響

C．一種限制酶只能識別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列

D．限制酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現的幾率就越小

若用限制酶A、B單獨或聯合切割一個5000bp（bp為堿基對）大小的線狀DNA分子，相關實驗及數據如下表。

	第一步水解	產物（bp）	第二步水解	產物（bp）
實驗1	A酶切割	2100	將第一步水解產物分離后，分別用B酶切割	200、1900
		1400		600、800
		1000		1000
		500		500
實驗2	B酶切割	2500	將第一步水解產物分離后，分別用A酶切割	1900、600
		1300		800、500
		1200		1000、200
實驗3	A酶、B酶同時切割	1900、1000、800、600、500、200

（5）由單酶剪切的片段數可知，A酶和B酶的酶切位點分別為_______個和_______個。

（6）綜合實驗數據的分析，在下圖中繪制出實驗3的酶切圖譜。

_______________

（每小格代表100bp）

Answer 1

【答案】2 SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 可以防止質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環化 蔗糖為唯一含碳營養物質 ABC 3 2

【解析】

（1）由于質粒在切割前是一個環狀DNA分子，當質粒被切割后形成了兩個末端各有1個游離的磷酸基團，故共有2個游離的磷酸基團。質粒抗生素抗性基因為標記基因，由圖可知，標記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位點，都可以被SmaI酶破環，故不能使用該酶剪切質粒和含有目的基因的DNA。

（2）構建含目的基因的重組質粒A時，選用 BamhHI 和HindⅢ酶對外源DNA和質粒進行切割，這樣使目的基因兩端的黏性末端不同，可以防止含目的基因的外源DNA片段自身環化，同理，也可以防止質粒自身環化。

（3）喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌不能在以蔗糖為唯一含碳營養物質的培養基中生長，而導入重組質粒的喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，能在以蔗糖為唯一含碳營養物質的培養基中培養，所以可以將受體細胞用以蔗糖為唯一含碳營養物質的培養基培養，完成目的基因表達的初步檢測。

（4）A、限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，即催化的是一種水解反應，A正確；

B、限制性內切酶的活性受溫度、pH的影響，在最適宜的溫度和pH條件下，酶的活性最高；溫度和pH偏高或偏低，酶的活性都會明顯降低；在過酸、過堿或溫度過高條件下酶會變性失活，而在低溫條件下酶的活性降低，但不會失活，B正確；

C、一種限制性內切酶只能識別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列，并在特定的位點切割磷酸二酯鍵，說明酶專一性，C正確；

D、限制性內切酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現的幾率就越大，D錯誤。

故選ABC。

（5）分析表格中的數據可知，單獨用A酶切割可以產生4個DNA片段，所以A酶的酶切位點有3個；單獨用B酶切割可以產生3個DNA片段，所以B酶的酶切位點有2個，該線性DNA分子上含有3個A酶切割位點，含有2個B酶切割位點。

（6）經A酶切割后獲得的2100bp片段，再用B酶切割后又產生200bp和1900bp兩個片段，則B酶的切割位點如圖1；經B酶切割后獲得的2500bp片段，再用A酶切割后又產生1900bp和600bp兩個片段，則A酶的切割位點如圖2

根據表中數據結合以上分析可知，A酶和B酶的切割位點如下：