Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產生的葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶。

（1）根據圖1、圖2相關酶的切點相關信息，為了將BglB基因和質粒DNA重組，應用_________酶分別切割質粒DNA和含BglB基因的DNA。

（2）要形成含BglB基因的重組質粒，還需加入[_________]酶。

A．DNA合成酶 B．β﹣葡萄糖苷酶

C．限制性內切酶 D．DNA連接酶

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述建構好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為_________。

（4）據圖3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纖維素，應考慮哪些因素？_________。因此，BglB酶降解纖維素的反應溫度最好控制在__________________。

A.50°C B.60°C C.70°C D.80°C

Answer 1

【答案】BamHI D 轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 酶的活性和酶的熱穩定性 B

【解析】

圖1為質粒DNA，抗生素抗性基因為標記基因，標記基因上有Xbol、Pstl酶的酶切位點。圖2為含有目的基因BglB基因的DNA片段，目的基因兩端有BamHⅠ、Xbol、EcoRⅠ、NdeⅠ的酶切位點。分析圖3，60～70℃時該酶的相對活性最高，而在40℃和80℃活性均降低，并且酶在高溫條件下會失活。分析圖4，隨著保溫時間的延長，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會失活；而隨著保溫時間的延長，70℃條件下的酶活性下降明顯。50℃和60℃條件下酶可以較長時間保持其活性。

（1）根據圖1、圖2相關酶的切點相關信息，為了將BglB基因和質粒DNA重組，應用BamHI酶分別切割質粒DNA和含BglB基因的DNA，Xbol、Pstl酶會破壞標記基因。

（2）要連接質粒和目的基因需要加入DNA連接酶。

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述建構好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。

（4）酶的活性受溫度影響，據圖3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纖維素，應考慮酶的活性和酶的熱穩定性。據圖3、4可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會失活；圖3中看出，60～70℃時該酶的相對活性最高，而圖4中看出，隨著保溫時間的延長，70℃條件下的酶活性下降明顯，因此為高效利用BglB酶降解纖維素，反應溫度最好控制在60℃。