Question

【題目】基因表達載體的構建是基因工程的核心。圖1為限制酶EcoRⅠ的識別序列，圖2表示目的基因及限制酶切點，圖3表示目的基因上的DNA片段，圖4表示質粒。

請回答下列問題：

（1）請在方框內寫出由圖1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端。

____

（2）圖3為目的基因中的某一片段，連接②處化學鍵的酶有_____________。

（3）若利用PCR技術増加目的基因的數量，由圖2可知，A、B、C、D四種單鏈DMA片段中除了B作為引物外，_________(填寫A或C或D）亦可作為引物。

（4）為了使目的基因和質粒定向連接并且有利于受體細胞的篩選，提高重組效率，應該選擇的限制酶是__________。

（5）如果大腸桿菌是受體細胞，則其體內應不含__________基因，以利于篩選出含重組質粒的受體菌。

Answer 1

【答案】 或 DNA聚合酶和DNA連接酶 C EcoRⅠ和PstⅠ 抗四環素

【解析】【試題分析】

本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作工具和操作步驟，能正確理解限制酶的特點。需要考生具備一定的識圖能力和獲取有效信息的能力，然后再結合題意梳理所學基礎知識，對各小題進行分析作答。

（1）由圖1可知，限制酶EcoRⅠ能夠專一識別GAATTC序列，并在G和A之間將這段序列切開。所以限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端可表示為：或。

（2）圖3中②處化學鍵為磷酸二酯鍵，DNA聚合酶和DNA連接酶都可連接②磷酸二酯鍵。

（3）若利用PCR技術增加目的基因的數量，由圖2可知，DNA復制只能從5’到3’，因此A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應選取 B和C作為引物。

（4）用兩種相同的限制酶分別切斷含目的基因的DNA片段和質粒，可使目的基因和質粒定向連接；質粒上至少保留一個抗性基因作為標記基因，有利于受體細胞的篩選。綜合分析圖2中目的基因兩端的限制酶切位點、圖4中質粒上的限制酶切位點，可推知應該選擇限制酶是PstⅠ、EcoRⅠ進行切割，這樣質粒上可以保留抗四環素基因，完全可以達到上述目的。

（5）由前面分析可知，重組質粒上的抗生素抗性基因屬于標記基因，應將該重組質粒導入到不含抗四環素基因的大腸桿菌細胞內，以利于篩選出含重組質粒的受體菌。