Question

6．圖1為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：

（1）圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制酶切取目的基因、切割質粒．限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點．
①畫出質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？可以連接理由是因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的．
（2）以圖2示中基因工程的核心是②（用序號表示），除了目的基因和標記基因外，其上還應包括啟動子和終止子．
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術．目的基因能否在受體母豬體內穩定遺傳的關鍵是目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA上．這需要檢測才能確定，檢測采用的方法是DNA分子雜交技術．
（4）目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②①③④（用數字表示）．
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸  ②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）             ④表達出藍色熒光蛋白．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：①表示目的基因的獲取，②表示基因表達載體的構建，③表示將目的基因導入豬胎兒的成纖維細胞，經過動物細胞培養篩選出轉基因體細胞，然后該細胞與另一只豬的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞．重組細胞經過早期胚胎培養到桑椹胚或囊胚期，最后經過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內，最后生成轉基因克隆豬．由此可見，該過程中利用基因工程、動物細胞培養、細胞核移植、早期胚胎培養和胚胎移植等技術．

解答 解：（1）①質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端如圖所示：

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能夠連接起來．
（2）基因工程的核心是基因表達載體的構建．基因表達載體含有綠色熒光蛋白基因（目的基因）、啟動子、終止子和標記基因．
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術．目的基因能否在受體母豬體內穩定遺傳的關鍵是目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA上，這需要采用DNA分子雜交技術進行檢測才能確定．
（4）采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列、①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸、③藍色熒光蛋白基因的修飾和④表達出藍色熒光蛋白．
故答案為：
（1）①
②可以連接      因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的
（2）②啟動子      終止子
（3）顯微注射技術  目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA上  DNA分子雜交技術
（4）②①③④

點評 本題考查基因工程和胚胎工程的相關知識，意在考查學生的識圖能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．