Question

【題目】 人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可通過轉基因技術在羊乳中獲得。流程如下：

（1）上述基因工程中，目的基因是_______；在重組表達載體中有一段特殊的DNA片段，是RNA聚合酶識別和結合的部位，這段DNA被稱為_____。基因工程所用DNA連接酶有兩類，其中只能連接黏性末端的是________DNA連接酶。

（2）常采用PCR技術擴增目的基因，在此過程中，由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA單鏈，只能從_____端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。

（3）成熟的基因表達載體除了含有目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及________________等。

（4）如果將基因表達載體導入大腸桿菌時，一般要用_________處理該菌，使之成為_____________細胞，以便吸收周圍環境中的DNA分子。

（5）科研人員通過_____法，將基因表達載體導入豬的受精卵中。可通過______技術，來檢測目的基因是否已導入到豬受精卵細胞的DNA分子上。

（6）在操作中要對供體母羊注射__________進行超數排卵處理；應采用____________法使精子體外獲能；對供體母羊和__________進行同期發情處理。該轉基因母羊進入泌乳期后，可以通過分泌的乳汁來生產htPA，因而被稱為________________。

（7）為了獲得含有htPA的羊乳，在移植前取早期胚胎滋養層細胞進行_____________。

Answer 1

【答案】人組織纖溶酶原激活物基因(或htPA基因） 啟動子 Ecoli 3’ 標記基因 鈣離子 感受態 顯微注射 DNA分子雜交 促性腺激素 化學誘導(或化學） 代孕母羊(受體母羊） 乳腺生物反應器(或乳房生物反應器） 性別鑒定

【解析】

目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA：分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質：抗原-抗體雜交技術。該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植。

（1）人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可通過轉基因技術在羊乳中獲得，所以基因工程中，目的基因是人組織纖溶酶原激活物基因，啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，啟動基因的轉錄。基因工程所用DNA連接酶有兩類，其中只能連接黏性末端的是EcoliDNA連接酶。
（2）在PCR技術擴增目的基因時，由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA單鏈，只能從3’端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。
（3）成熟的基因表達載體除了含有目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及標記基因。
（4）如果將基因表達載體導入大腸桿菌時，一般要用鈣離子處理該菌，使之成為感受態細胞，以便吸收周圍環境中的DNA分子。
（5）將基因表達載體導入豬的受精卵中，常用顯微注射法。檢測目的基因是否已導入到豬受精卵細胞的DNA分子上，常用DNA分子雜交技術。
（6）為了獲取更多的卵子，需要使用促性腺激素對母羊進行超數排卵處理，采用化學誘導的方法使精子獲能，胚胎移植前需要供體母羊和代孕母羊進行同期發情處理，目的是為供體胚胎的移入提供相同的生理環境。轉基因母羊進入泌乳期后，可以通過分泌的乳汁來生產htPA，因而被稱為乳腺生物反應器。
（7）為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定。