Question

17．利用基因工程技術將突變的IPA1基因轉入水稻細胞中從而獲得某水稻新品種．
（1）培育該轉基因水稻新品種的核心是構建重組DNA分子，該過程需要用到的工具酶有限制性核酸內切酶、DNA連接酶．
本實驗中常用CaCl₂處理土壤農桿菌其目的是，增加其細胞壁的通透性，便于重組質粒的導入．
（2）在含目的基因的水稻細胞培育成植株過程中可以將含有愈傷組織的培養物放在搖床上，通過液體懸浮培養分散成單細胞．在該水稻的培養過程中，相關敘述正確的是D
A．配制只含有適當營養物質的培養基，倒在滅菌試管中凝固成半固體 
B．從滅菌的根、莖或葉上切取一些小組織塊，進行培養 
C．這種單細胞具有細胞質豐富、液泡大、細胞核大的特征
D．水稻體細胞與這種單細胞的全能性表達程度大不相同
（3）利用水稻細胞制備原生質體時，需在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液中進行處理，該溶液濃度與水稻細胞中的細胞液濃度相當．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟是構建基因表達載體，該過程首先要用同種限制酶切割目的基因和外源DNA分子，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．本實驗中常用CaCl₂處理土壤農桿菌其目的是，增加其 細胞壁的通透性，使之成為感受態細胞，便于重組質粒的導入．
（2）在含目的基因的水稻細胞培育成植株過程中可以將含有愈傷組織的培養物放在搖床上，通過液體懸浮培養分散成單細胞．
A．配制含有適當營養物質和植物生長調節劑的培養基，A 錯誤；
B．從消毒的根、莖或葉上切取一些小組織塊，B錯誤；
C．這種單細胞具有細胞質豐富、液泡小、細胞核大的特征，C錯誤；
D．水稻體細胞比這種單細胞的全能性表達程度要小，D正確．
故選：D．
（3）利用水稻細胞制備原生質體時，需在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液中進行處理，該溶液濃度與水稻細胞中的細胞液濃度相當，這樣可以維持一定的滲透壓，保持原生質體的形態．
故答案為：
（1）重組DNA分子      限制性核酸內切酶、DNA連接酶（寫全得分）     細胞壁
（2）液體懸浮     D 
（3）細胞液

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能結合所學的知識準確答題．