Question

【題目】鐵皮石斛是一種名貴中藥材，有生津養胃、降血糖和增強免疫力等作用，有效成分為石斛多糖、石斛堿等，溫州雁蕩山素有“中國鐵皮石斛之鄉”的美譽。請回答：

（1）用優良品種自然生長的莖快速繁殖鐵皮石斛時，給莖消毒時無需使用的是________ (A.乙醇B.無菌水 C.甘露醇 D.次氯酸鈉)。在細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養基中培養莖的切段，待長出較多的__________，將其進行__________(處理）后再轉入__________培養基中繼續培養，直至長成幼苗。這種通過組織培養技術快速繁殖植物的方法，也稱為__________。

（2）研究發現，鐵皮石斛的生長發育與其體內的內生菌密切相關。為進一步研究內生菌作用, 需要大量內生菌進行相關實驗。分離內生菌時最好采用_________ (A.G6玻璃砂漏斗過濾法 B.血細胞計數法 C.劃線分離法 D.涂布分離法），再將純化的內生菌轉移到液體培養基中進行_____________。

（3）研究發現，200mg/L濃度的卡那毒素能有效抑制鐵皮石斛細胞的增殖與分化。科學家欲利用卡那霉素，采用農桿菌轉化法對現有鐵皮石斛品種進行基因改良。在基因工程操作中,導入受體細胞的_________分子應同時帶有目的基因和________基因，這樣才能利用含有卡那霉素的培養基將成功導入目的基因的受體細胞篩選出來。

（4）鑒定鐵皮石斛的品質，可通過苯酚-濃硫酸法測定石斛多糖的含量。其原理是：石斛多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物后，與苯酚縮合生產橙黃色化合物，在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標準溶液建立標準曲線，便可知道樣品的石斛多糖含量。這種方法類似于泡菜汁中_____________含量的測定，稱之為_____________法。

（5）為高效提取石斛多糖，可在提取液中加入___________，以提高鐵皮石斛的出汁率。

Answer 1

【答案】 C 叢壯苗 分株∕分株培養 生根 植物克隆 D 擴大培養 重組DNA∕重組質粒 卡那霉素抗性∕抗卡那霉素 亞硝酸鹽 光電比色 果膠酶∕果膠酶和果膠甲酯酶∕果膠酶和纖維素酶∕果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶

【解析】試題分析：本題考查植物組織培養、微生物培養、基因工程、植物有限成分的提取，考查對相關技術原理的理解和對操作流程的識記。

（1）給莖消毒時需要使用70%的乙醇、無菌水和5%次氯酸鈉，無需使用甘露醇。細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養基中容易生芽，待長出較多的叢壯苗，將其進行分株∕分株培養后再轉入生根培養基中繼續培養，直至長成幼苗。這種通過組織培養技術快速繁殖植物的方法也稱為植物克隆。

（2）涂布分離法更容易使單菌落分開，分離鐵皮石斛的內生菌時最好采用涂布分離法。再將純化的內生菌轉移到液體培養基中進行擴大培養。

（3）導入受體細胞的重組DNA（重組質粒分子）應同時帶有目的基因和卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因，抗卡那霉素基因作為標記基因，可以利用含有卡那霉素的培養基將成功導入目的基因的受體細胞篩選出來。

（4）在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標準溶液建立標準曲線，這種方法類似于泡菜汁中亞硝酸鹽含量的測定，稱之為光電比色法。

（5）細胞的主要成分為纖維素和果膠，植物細胞壁的存在影響細胞成分的提取，高效提取石斛多糖，可在提取液中加入果膠酶（果膠酶和果膠甲酯酶或果膠酶和纖維素酶或果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶），以提高鐵皮石斛的出汁率。