Question

海洋中的發光細菌具獨特的生理特性，可作為環境監測的指標生物。

I.（1）使用              法（答二種），可在固體培養基上獲得單菌落，純化發光菌株。

（2）細菌這類微生物在基因工程中有重要應用，試列舉其中一項。

II．現利用發光細菌對海水重金屬污染程度進行生物毒性監測，請完善下列實驗設計并回答問題：

實驗原理：細菌代謝正常時，發光強度穩定；當重金屬影響到其代謝時，發光會受到抑制，抑制程度用抑光率（發光被抑制的百分率）表示。

實驗材料：發光菌懸液、可能受重金屬污染的待測海水水樣、3%NaCl溶液、熒光分光光度計（用于測定細菌發光強度）、試管等。

（1）實驗步驟：按下表配制待測海水樣品稀釋液。

組   別	1	2	3	4	5
3%NaCl溶（mL）		4.74	4.49	4.24	3.99
海水樣品（mL）		0.25	0.50	0.75	1.00
發光菌懸液（mL）		0.01	0.01	0.01	0.01
混合液中海水濃度（%）		0.05	0.10	0.15	0.20

請完善實驗步驟：

①1號試管中應加入：3％NaCl溶液、海水樣品、發光菌懸液分別為           mL（3分）。

②各試管靜置15min后，                                                     。

（2）計算相對抑光率：按照公式T％=                           計算各組相對抑光率。

（3）如果測得上述各組相對抑光率如下：

組別	1	2	3	4	5
相對抑光率（%）	0	6	13	17	23

①請繪制海水濃度對相對抑光率影響的曲線（3分）。

②根據結果可以判斷待測海水樣品                                       。

 

Answer 1

【答案】

I.（1）平板劃線法、稀釋涂布平板法；  

（2）提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的載體、作為受體細胞、提供用于發酵的工程菌（答對其中一項即可）。

II.（1）①4.99、0、0.01（每項1分，共3分） ②利用熒光分光光度計測定各試管發光強度

（2）（對照組發光強度－實驗組發光強度）/對照組發光強度×100%

（3）①下圖（3分）；②受到重金屬污染

【解析】

試題分析：I.要在培養基中看到菌落，所以應是固定培養基，固體培養基的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法； 細菌在基因工程中可以提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的載體、作為受體細胞、提供用于發酵的工程菌等；II.由2345組可知3％NaCl溶液、海水樣品、發光菌懸液加在一起是10ml，海水樣品一每組0.25遞增，發光菌懸液0.01ml不變，所以1號試管中應加入：3％NaCl溶液、海水樣品、發光菌懸液分別為4.99 mL、0 mL、0.01mL；一段時間后利用熒光分光光度計測定各試管發光強度，計算其相對抑光率。1組沒有加入海水樣品，則其為空白對照，抑光率=（對照組發光強度－實驗組發光強度）/對照組發光強度×100%，通過計算抑光率繪制曲線，發現當混合液中海水濃度為1時計算，抑光率是120%，則為重度污染。

考點：本題考查了微生物的培養、實驗探究的相關知識，意在考查考生能理解所學知識的要點，具有對一些生物學問題進行初步探究、并能對實驗現象和結果進行解釋、分析和處理的能力。