Question

2006年12月22日，我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農業大學的種豬場自然分娩產出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平．下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖回答：

（1）過程①必需用到的酶是

 

．
（2）重組質粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有啟動子、終止子和

 

才能構成一個完整的基因表達載體．
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是

 

．然后還要通過

 

技術來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（4）為了獲得更多的豬卵母細胞，可通過對母豬注射促性腺激素的方法，做

 

處理，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到

 

期即可通過顯微操作將其細胞核去除．
（5）如果想同時得到多頭綠色熒光蛋白轉基因克隆豬，可通過胚胎分割技術得以實現．但應選擇發育到

 

時期的早期胚胎進行操作，且要注意將內細胞團

 

，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,胚胎移植,胚胎分割移植

專題：

分析：據圖分析，①表示獲取綠色熒光蛋白基因，②表示基因表達載體的構建，③表示將目的基因導入受體細胞，④表示取供體細胞的細胞核，⑤去除卵母細胞的細胞核，⑥表示核移植，⑦表示早期胚胎的培養，⑧表示胚胎移植．

解答： 解：（1）①過程表示獲取目的基因，必需用到限制性核酸內切酶（限制酶），特點是能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）基因表達載體含有綠色熒光蛋白基因（目的基因），啟動子、終止子和標記基因．
（3）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，一般采用顯微注射技術；然后通過DNA分子雜交技術來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（4）對母豬注射促性腺激素，使其超數排卵，并將所采集到的卵母細胞在體外培養到減數分裂第二次分裂中期，再通過顯微操作將其細胞核去除．
（5）通過胚胎分割技術獲得多頭綠色熒光蛋白轉基因克隆豬，一般選擇發育到桑椹胚或囊胚時期的早期胚胎進行操作，要注意將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．
故答案為：
（1）限制性核酸內切酶（限制酶）  
（2）標記基因    
（3）顯微注射技術   DNA分子雜交
（4）超數排卵   減數分裂第二次分裂中期         
（5）桑椹胚或囊胚    均等分割

點評：本題考查基因工程和胚胎工程的相關知識，意在考查學生的識圖和分析問題的能力，屬于中檔題．