Question

（8分）下圖表示血紅蛋白提取和分離實驗的部分裝置或操作方法，請回答下列問題：

（1）如圖甲，表示            過程，該操作目的是去除樣品中            的雜質。現有一定量的血紅蛋白溶液，進行上述操作時若要盡快達到理想的實驗效果，可以                                 （寫出一種方法）。

（2）如圖乙，往色譜柱中加樣的正確操作順序是         （用序號表示）。在進行④操作前，應該等樣品               ，且要         （填“打開”或“關閉”）下端出口。

（3）a、b均為蛋白質分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是       ，原因是          

 

Answer 1

【答案】

 

（1）透析（粗分離）    分子量較小    增加緩沖液的量或及時更換緩沖液

（2）②③④①    完全進入凝膠層    關閉

⑶a　a相對分子質量較大，無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快

【解析】分離蛋白質的流程圖為樣品處理，粗分離即為透析，純化凝膠色譜，統一計劃鑒定，離心血液會使血細胞和血漿中的蛋白質分開。在使蛋白質釋放的過程上，除使用蒸餾水外，還應加入甲苯。提取的成為為血紅蛋白，一般呈現紅色；增加緩沖液的量或及時更換緩沖液快速達到理想效果，往色譜柱中加樣的操作順序為裝好的色譜柱至少要用相當于3倍保留體積的洗脫劑平衡，待洗脫劑流至與凝膠柱液面相平時（不能流干，否則會帶入氣泡），用滴管吸取樣品溶液，在高于凝膠表面約1cm處，沿管壁四周緩緩滴加樣品液，加完后打開下面的出口，使樣品滲入凝膠內。再關閉出口，用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下，再打開出口，至溶液滲入柱內，再關閉出口。可以考慮再加一層薄薄的脫脂棉以保護柱表面（我一般不加），然后即可進行洗脫。所以為②③④①，用凝膠色譜技術分離各種大分子物質時，大分子物質先洗脫出來，然后是小分子物質。大分子物質由于直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔，而只能分布于顆粒之間，所以向下移動的速度較快。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外，還可以進入凝膠顆粒的微孔，即進入凝膠內，在向下移動的過程中，從一個凝膠顆粒內擴散到顆粒間隙后再進入另一凝膠顆粒，如此不斷地進入和擴散，小分子物質的下移速度落后于大分子物質從而落后于大分子物質洗脫出來。在色譜柱中裝填凝膠的時候要盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。一是在裝填凝膠柱時，不得有氣泡存在，因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。二是凝膠色譜操作過程中，不能發生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現象。