Question

17．Graves�。℅D）可導致甲狀腺功能亢進．研究發現，GD患者甲狀腺細胞表面表達大量細胞間粘附分子1（ICAM-1），導致甲狀腺腫大．科研人員通過制備單克隆抗體，對治療GD進行了嘗試．
（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養板的不同孔中，多孔培養板中需加入ICAM-1以檢測這些小鼠產生的抗體．依據反應結果，選出陽性反應最強的培養孔所對應的小鼠M．
（2）實驗用骨髓瘤細胞置于（5%）CO₂恒溫培養箱中37℃培養，融合前將部分培養細胞置于含HAT的選擇性培養基中培養，一段時間后培養基中無（填“有”或“無”）骨髓瘤細胞生長，說明培養基符合實驗要求．
（3）取小鼠M的脾臟細胞制備成細胞懸液，與實驗用骨髓瘤細胞進行融合，用選擇培養基篩選得到具有無限增殖能力的細胞．將獲得的上述細胞在多孔培養板上培養，用ICAM-1檢測，從中選擇大量產生抗ICAM-1抗體的雜交瘤細胞，植入小鼠腹腔中克隆化培養，一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體．
（4）若進一步比較實驗用抗體和¹³¹I對GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請補充下表中的實驗設計．

對照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0.1mL無菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的131I	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

Answer 1

分析 1、單克隆抗體：由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產生出的化學性質單一、特異性強的抗體．具有特異性強、靈敏度高，并可能大量制備的特點．
2、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內，使其發生免疫，小鼠體內產生具有免疫能力的B淋巴細胞．利用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），不需要A、B、AA、BB型細胞．第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產生特定抗體的雜交瘤細胞．

解答 解：（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養板的不同孔中，多孔培養板中需加入ICAM-1以檢測這些小鼠產生的抗體．依據反應結果，選出陽性（或“抗原-抗體”）反應最強的培養孔所對應的小鼠M．
（2）實驗用骨髓瘤細胞置于（5%）CO₂恒溫培養箱中37℃培養，融合前將部分培養細胞置于含HAT的選擇培養基中培養，一段時間后培養基中無骨髓瘤細胞生長，說明培養基符合實驗要求．
（3）取小鼠M的脾臟細胞制備成細胞懸液，與實驗用骨髓瘤細胞進行融合，用選擇培養基篩選得到具有無限增殖能力的細胞．將獲得的上述細胞在多孔培養板上培養，用ICAM-1檢測，從中選擇大量產生抗ICAM-1 抗體的雜交瘤細胞，植入小鼠腹腔中克隆培養，一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體．
（4）根據題干中實驗目的“比較實驗用抗體和¹³¹I對GD 模型小鼠的治療作用”，單克隆抗體治療組（C）中應給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體．
故答案為：
（1）ICAM-1    陽性（或“抗原-抗體”）
（2）（5%）CO₂    無
（3）無限增殖      抗ICAM-1抗體    克隆化
（4）給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

點評 本題考查了單克隆抗體的制備以及動物細胞培養的有關知識，要求考生能夠識記單克隆抗體制備的過程，掌握兩次篩選的方法原理，并能夠利用對照實驗的原則對實驗進行補充設計，難度適中．