科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達。下圖表示構建重組質粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據圖回答：
（1）步驟①和②中常用的工具酶是
。
（2）經過①和②步驟后，有些質粒上的
基因內插入了外源目的基因，形成重組質粒。
（3）步驟③是
的過程。
（4）步驟④：將三角瓶內的大腸桿菌接種到含四環素的培養基C上培養，目的是篩選
。
（5）步驟⑤:用無菌牙簽挑取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環素）和E（含四環素）兩個培養基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于（選填“D”或“E”）
上。
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解析:
